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如何選擇合適的內(nèi)參抗體？

如何選擇合適的內(nèi)參抗體？Tips：在選擇內(nèi)參抗體時，我們需要遵循幾個原則：1.種屬來源哺乳動物的樣本需要選擇哺乳動物中穩(wěn)定表達的蛋白作為內(nèi)參，同樣的，植物樣本需要選擇植物中穩(wěn)定表達的蛋白作為內(nèi)參。2.細胞定位靶標(biāo)蛋白的細胞定位不同，適合的內(nèi)參也不同。如全細胞裂解液可選擇beta-actin、beta-tubulin等，膜蛋白一般選擇NaKATPase，核蛋白則選擇LaminB1、HistoneH3等。3.分子量內(nèi)參蛋白的分子量需要與目標(biāo)蛋白的分子量有所區(qū)別，否則兩者條帶無法分...

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TUNEL法細胞凋亡檢測假陽性率高怎么破？

TUNEL法基于對細胞DNA損傷的檢測，通常可用于檢測組織切片樣本和細胞樣本，是晚期細胞凋亡檢測中常用的方法。那么對于檢測過程中常見的假陽性率高的現(xiàn)象是如何產(chǎn)生的呢？1.固定操作不當(dāng)固定液選擇不恰當(dāng)，固定液濃度過高，固定時間過長，組織切片過厚都會影響固定效果。一般建議選擇含4%多聚甲醛的PBS溶液來固定細胞或組織切片，時間在30min左右。2.基因轉(zhuǎn)錄水平高基因轉(zhuǎn)錄活性高的非凋亡細胞會產(chǎn)生假陽性，例如睪丸組織。3.激發(fā)光下長時間照射在強激發(fā)光長時間照射下，高濃度的PI會吸收能...

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原代細胞分離與培養(yǎng)

原代細胞(primarycell)是指從生物體獲取細胞直接培養(yǎng)。通常，把培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。由于細胞剛從活體組織分離出來，因此原代細胞更接近于生物體內(nèi)的生活狀態(tài)，且生物性狀尚未發(fā)生很大改變。這一方法可為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段，同時也為以后傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件。原代細胞的分離與培養(yǎng)常用的原代細胞培養(yǎng)方法有組織塊培養(yǎng)和分散組織培養(yǎng)。組織塊培養(yǎng)：是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上，加入培養(yǎng)基后進行培養(yǎng)。組織塊培養(yǎng)法是常用的、...

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